概述

        来自极端耐热古生菌Thermococcus kodakaraensis (KOD )的DNA聚合酶一种新的高保真快速耐热DNA聚合酶,该酶的扩增速度更是pfu DNA聚合酶的4倍，保真性更好，耐热温度更高,是效率最高的热稳定DNA聚合酶。KOD DNA聚合酶具有3’-5’外切酶活性，即校正功能，保证能快速地识别并纠正错误掺入的核苷酸。本品没有5’-3’ 外切活性。

        本产品是KOD DNA聚合酶基因在大肠杆菌中获得表达后经过分离纯化获得的高纯度高活性重组KOD DNA聚合酶，应用于PCR获得的平端产物适合进行各种平端连接的克隆操作。

包装

       KOD DNA 聚合酶(5U/μl)  Cat No. RE-12-003      250 U       1,000 U

       10X 缓冲液                                                         1000 μl        1000 μl

典型PCR条件

        通常下面推荐的标准反应都能获得满意的扩增结果，需要的提醒的是每次扩增都应该包括一个不加入模板的阴性对照和一个已知模板和引物的阳性对照以帮助了解扩增反应。通过酶浓度、镁离子、模板和引物的优化，能够获得更好的扩增结果。

1、对一个50μl的扩增反应，按下表在0.5ml PCR管加入各组分，置冰浴备用，

2、轻轻混合后离心使反应组分沉于管底。如果需要可加矿物油覆盖反应物，盖好管帽，置于热循环仪。

3、下表是几种可选择的热热循环扩增程序，需要注意的是引物的选择会影响退火温度。通常的退火温度比以引物做为扩增起点的Tm 低5°C。

4、扩增产物的分析：从反应液下层吸取10μl扩增样品，加入上样缓冲液，含0.5μg/ml的EB琼脂糖凝胶电泳分析，并在紫外灯下成像进行条带分析。

保存

        保存于-20°C。