产品类别
产品展示 > 其它鼠尾I型胶原蛋白
产品名称:鼠尾I型胶原蛋白
产品简介:用于细胞培养器皿的包被,特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养;也可用于制备三维胶原凝胶,使细胞在模拟的三维环境中生长.
 

产品简介

         鼠尾I型胶原蛋白( Collagen from rat tail, Type I)系采用Birkedal-Hansen方法在无菌条件下制备,纯度达到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于细胞培养器皿的包被,特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养;也可用于制备三维胶原凝胶,使细胞在模拟的三维环境中生长。

质量标准

        1、SDS-PAGE分析纯度大于95%。

        2、无菌检验结果为阴性。

        3、本品2ug/cm2包被细胞培养皿后培养PC-12细胞,贴壁及生长正常。

        4、本品浓度1mg/ml,pH7.0时形成具有一定强度的三维胶原凝胶,NIH-3T3细胞在三维凝胶内生长正常、PC-12细胞在三维胶表面生长正常。

使用方法

1、细胞培养器皿的表面包被

        以包被浓度为2ug/cm2为例,用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按下表体积加到相应的培养器皿中,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。开盖在超净台上过夜晾干,也可以在室温放置1小时后,用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在4-25ºC至少可保存3个月以上的时间。

培养器皿

表面积(cm2,每孔或每皿)

0.012mg/ml胶原体积(µl)

96孔细胞培养板

0.3

50

24孔细胞培养板

1.9

300

12孔细胞培养板

3.8

600

6孔细胞培养板

9.5

1580

35mm细胞培养皿

8

1330

60mm细胞培养皿

21

3500

100mm细胞培养皿

55

9170

 

2、三维胶原凝胶的制备

A、无细胞三维胶原凝胶的制备(以配制1mg/ml三维胶1ml为例)

        将200µl本品加到置于冰浴的离心管中,加入690µl双蒸水,然后加到12µl0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12µl0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入100µl10xPBS或10x培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值)。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B、含细胞三维胶原凝胶的制备(以配制1mg/ml三维胶1ml为例)

        准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200µl本品加到12µl0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12µl0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23µl10xPBS或10x培养液,混匀(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值)。加入760µl的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20min待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。本品在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。

保存条件

        4℃保存,切勿冻存,有效期一年。

参考文献

1、Paul J. Price,1975,Preparation and use of rat-tail collagen,Methods in Cell Science,1(1):43-44;

2、Birkedal-Hansen, H. Catabolism and turnover of collagens:Collagenases,Methods Enzymol. 1987,144:140-171.